新聞動態

行業新聞

網站首頁 > 新聞動態 > 行業新聞
  • 超低溫保存病毒的方法介紹
  • 本站編輯:杭州AG放水时间生物科技有限公司發布日期:2018-08-22 09:25 瀏覽次數:

很多微生物都需要用低溫用保存,因此超低溫保存法是適用範圍廣的微生物保存法。需要複雜營養的微生物種,如用其他的貯存方法不能保持其活力(如植物的病原性真菌),通常可用超低溫的方法保存(ATCC1983;Halliday,Baker1985)。此法是將凍存在小管或安瓿裏的細胞以較慢的冷凍速率(1℃/分鍾)冷凍,直至—150℃,再將這些小管貯存在—150~-196℃的液氮中。

1.jpg

超低溫的冷凍保護劑不同於凍幹法所用的冷凍劑。ATCC常用一種由甘油(10%)、二甲亞碸(5%)和培養液製成的混合劑保存多數的細胞株。這些化學試劑進入細胞內可避免內膜的冷凍損傷。貯存在低溫容器內的細胞複蘇時必須小心操作。當小管被加熱時,所形成的冰晶會將細胞殺死,正確操作就可避免這種事故。隻要迅速將樣品解凍就能減少活力的丟失,做法是:將封口的小管迅速放入37℃的水中,直至所有的冰融化,然後打開管口,將內容物移入培養基。

超低溫保藏的微生物須始終貯存在溫度非常低的環境中,因此需要液氮罐。在長期貯存的過程中須經常注意補充液氮。這種貯存方式比凍幹法需要更多的經費,包括為了維持貯存溫度所必要的勞動力和液氮等。

1材料

病毒超低溫保存所需材料有:熱收縮塑料管(NuncCryoflex),液氮罐,防護手套和麵罩,永久性記號筆,氣體噴燈,裝液氮的保溫瓶。

2方法

(1)剪一段兩端各超出冷凍管長度2cm的熱收縮塑料管。

(2)將含有澄清病毒懸液(組織培養的上清培養基,或組織培養基內的細胞溶解產物均可)冰浴幾分鍾,用滅菌移液管將0.2ml冰浴過的上清懸液分裝到冷凍管內,並將蓋子擰緊。

(3)將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部,插入正確的標簽。

(4)用噴燈小心加熱熱收縮塑料管,並使之包住冷凍管。注意不要用太高的溫度加熱熱收縮塑料管。

(5)再小心加熱熱收縮塑料管的兩端,用大號鑷子夾緊管的端口至完全密封。

(6)將密封好的冷凍管快速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍(操作時要求戴麵罩和手套)。

(7)將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內,同時記錄樣品的詳細的存放位置、實驗編號和存放日期等。

(8)需要用時,迅速從液氮罐內取出所需樣品,並投入37℃水浴箱中解凍後,用解剖刀片在冷凍管的矽化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時不需要除去熱收縮塑料管。